Анализ соматических мутаций в генах JAK2, CALR, MPL и ASXL1 и оценка их влияния на выживаемость пациентов с миелофиброзом

Введение. Развитие миелофиброза (МФ) обусловлено сложными молекулярно-генетическими событиями, которые включают драйверные соматические мутации, ответственные за конститутивную активацию JAK/STAT-сигнального пути (JAK2, CALR и MPL), дополнительные мутации, затрагивающие эпигенетические регуляторы (TET2, ASXL1, IDH1/2 и др.) и сплайсинг РНК (SRSF2, U2AF1, SF3B1 и др.), а также генетические аберрации, способствующие геномной нестабильности и прогрессированию заболевания.

Цель исследования – проанализировать драйверные (JAK2, CALR, MPL) и прогностические (ASXL1) соматические мутации у пациентов с МФ и оценить их влияние на выживаемость.

Материалы и методы. В исследование были включены 29 пациентов с МФ, отобранных врачами-гематологами Городской клинической больницы №7 и Краевой клинической больницы (Красноярск).

Результаты. У 26 (89,6 %) из 29 обследованных пациентов выявлены какие-либо драйверные мутации в генах JAK2, CALR, MPL. Мутация p.V617F в гене JAK2 была обнаружена у 20 (68,9 %) пациентов. Мутации в гене CALR выявлены у 4 (13,8 %) пациентов, в гене MPL – у 3 (10,3 %). У 1 из 26 пациентов присутствовали одновременно 2 драйверные мутации. Тринегативными оказались 3 (10,3 %) пациента. Соматические мутации в гене ASXL1 выявлены методом Сэнгера у 12 (41,4 %) из 29 обследованных пациентов. Проведение таргетного секвенирования нового поколения (NGS) для 13 из 29 пациентов позволило обнаружить дополнительные генетические варианты, способствующие пониманию механизма развития и течения заболевания. При оценке общей выживаемости в группах обследуемых пациентов с диагнозом МФ, проведенной в зависимости от сочетания драйверных (JAK2, CALR, MPL) и прогностических (ASXL1) мутаций, статистически значимых различий не выявлено (p = 0,12), что, по-видимому, обусловлено небольшим размером выборки. В то же время оценка выживаемости пациентов в зависимости от ASXL1-статуса показала, что при наличии мутаций в гене ASXL1 медиана выживаемости составила 45 (7–120) мес, тогда как при отсутствии мутаций – 48 (21–359) мес (р = 0,03).

Заключение. Полученные результаты позволяют предположить, что присутствие мутации в гене ASXL1 является неблагоприятным фактором течения заболевания.

1. Luque Paz D., Riou J., Verger E. et al. Genomic analysis of primary and secondary myelofibrosis redefines the prognostic impact of ASXL1 mutations: a FIM study. Blood Adv 2021;5(5):1442–51. DOI:10.1182/bloodadvances.2020003444

2. Morishita S., Ochiai T., Misawa K. et al. Clinical impacts of the mutational spectrum in Japanese patients with primary myelofibrosis. Int J Hematol 2021;113(4):500–7. DOI:10.1007/s12185-020-03054-x

3. Morsia E., Gangat N. Myelofibrosis: challenges for preclinical models and emerging therapeutic targets. Expert Opin Ther Targets 2021;25(3):211–22. DOI:10.1080/14728222.2021.1915992

4. Barbui T., Thiele J., Gisslinger H. et al. The 2016 WHO classification and diagnostic criteria for myeloproliferative neoplasms: document summary and in-depth discussion. Blood Cancer J 2018;8(2):15. DOI:10.1038/s41408-018-0054-y

5. Меликян А.Л., Ковригина А.М., Суборцева И.Н. и др. Национальные клинические рекомендации по диагностике и лечению Ph-негативных миелопролиферативных заболеваний (истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии, первичного миелофиброза) (редакция 2020 г.). Клиническая онкогематология 2021;14(2):262–98. DOI:10.21320/2500-2139-202114-2-262-298

6. Vannucchi A.M., Lasho T.L., Guglielmelli P. et al. Mutations and prognosis in primary myelofibrosis. Leukemia 2013;27(9):1861–9. DOI:10.1038/leu.2013.119

7. Abdel-Wahab O., Adli M., LaFave L.M. et al. ASXL1 mutations promote myeloid transformation through loss of PRC2-mediated gene repression. Cancer Cell 2012;22(2):180–93. DOI:10.1016/j.ccr.2012.06.032

8. Alvarez Argote J., Dasanu C.A. ASXL1 mutations in myeloid neoplasms: pathogenetic considerations, impact on clinical outcomes and survival. Curr Med Res Opin 2018;34(5):757–63. DOI:10.1080/03007995.2016.1276896

9. Larsen T.S., Christensen J.H., Hasselbalch H.C. et al. The JAK2 V617F mutation involves B- and T-lymphocyte lineages in a subgroup of patients with Philadelphia-chromosome negative chronic myeloproliferative disorders. Br J Haematol 2007;136(5):745–51. DOI:10.1111/j.1365-2141.2007.06497.x

10. Дунаева Е.А., Миронов К.О., Дрибноходова О.П. и др. Количественное определение мутации V617F в гене JAK2 методом пиросеквенирования. Клиническая лабораторная диагностика 2014;59(11):60–3.

11. Субботина Т.Н., Харсекина А.Е., Дунаева Е.А. и др. Использование гетеродуплексного анализа и пиросеквенирования в алгоритме диагностики истинной полицитемии, ассоциированной с соматическими мутациями в 12 экзоне гена JAK2. Лабораторная служба 2017;6(1):29–33. DOI:10.17116/labs20176129-33

12. Субботина Т.Н., Курочкин Д.В., Маслюкова И.Е. и др. Использование гетеродуплексного анализа для скринингового выявления соматических мутаций в 9 экзоне гена CALR у пациентов с Ph-МПН. Онкогематология 2021;16(2):48–55. DOI:10.17650/1818-8346-2021-16-2-48-55

13. Stein B.L., Williams D.M., O’Keefe C. et al. Disruption of the ASXL1 gene is frequent in primary, post-essential thrombocytosis and post-polycythemia vera myelofibrosis, but not essential thrombocytosis or polycythemia vera: analysis of molecular genetics and clinical phenotypes. Haematologica 2011;96(10):1462–9. DOI:10.3324/haematol.2011.04559

14. Szuber N., Tefferi A. Driver mutations in primary myelofibrosis and their implications. Curr Opin Hematol 2018;25(2):129–35. DOI:10.1097/MOH.0000000000000406

15. Kapralova K., Horvathova M., Pecquet C. et al Cooperation of germ line JAK2 mutations E846D and R1063H in hereditary erythrocytosis with megakaryocytic atypia. Blood 2016;128(10):1418–23. DOI:10.1182/blood-2016-02-698951

16. Pikman Y., Lee B.H., Mercher T. et al. MPLW515L is a novel somatic activating mutation in myelofibrosis with myeloid metaplasia. PLoS Med 2006;3(7):e270. DOI:10.1371/journal.pmed.0030270

17. Tefferi A., Lasho T.L., Finke C.M. et al. Targeted deep sequencing in primary myelofibrosis. Blood Adv 2016;1(2):105–11. DOI:10.1182/bloodadvances.2016000208

18. Полушкина Л.Б., Шуваев В.А., Фоминых М.С. и др. Современные генетические модели оценки прогноза при первичном миелофиброзе. Клиническая онкогематология 2019;12(4):391–7. DOI:10.21320/2500-2139-2019-12-4-391-397

19. Tefferi A., Mudireddy M., Mannelli F. et al. Blast phase myeloproliferative neoplasm: Mayo-AGIMM study of 410 patients from two separate cohorts. Leukemia 2018;32(5):1200–10. DOI:10.1038/s41375-018-0019-y

20. Scherber R.M., Mesa R.A. Managing myelofibrosis (MF) that “blasts” through: advancements in the treatment of relapsed/ refractory and blast-phase MF. Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2019;2019(1):630. DOI:10.1182/hematology.201900100

21. Ferrer-Marín F., Bellosillo B., Martínez-Avilés L. et al. Leukemic transformation driven by an ASXL1 mutation after a JAK2V617Fpositive primary myelofibrosis: clonal evolution and hierarchy revealed by next-generation sequencing. J Hematol Oncol 2013;6:68. DOI:10.1186/1756-8722-6-68

22. Conte N., Varela I., Grove C. et al. Detailed molecular characterisation of acute myeloid leukaemia with a normal karyotype using targeted DNA capture. Leukemia 2013;27(9): 1820–5. DOI:10.1038/leu.2013.117

23. Mason C.C., Khorashad J.S., Tantravahi S.K. et al. Age-related mutations and chronic myelomonocytic leukemia. Leukemia 2016;30(4):906–13. DOI:10.1038/leu.2015.337

24. Park D.J., Kwon A., Cho B.S. et al. Characteristics of DNMT3A mutations in acute myeloid leukemia. Blood Res 2020;55(1):17–26. DOI:10.5045/br.2020.55.1.17

25. Grand F.H., Hidalgo-Curtis C.E., Ernst T. et al. Frequent CBL mutations associated with 11q acquired uniparental disomy in myeloproliferative neoplasms. Blood 2009;113(24):6182–92. DOI:10.1182/blood-2008-12-194548