Молекулярные методы в идентификации истинной групповой принадлежности эритроцитов у пациентов с заболеваниями системы крови перед трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток и их доноров

Введение. при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) необходимо учитывать несовместимость донора и реципиента по антигенам эритроцитов для оценки возможности иммунологических осложнений при трансфузии ГСК и/или приживлении трансплантата (острый гемолиз, отсроченный гемолиз и др.). результаты серологических методов исследования не всегда позволяют идентифицировать истинную групповую принадлежность вследствие посттрансфузионного химеризма у больных и/или присутствия аллельного полиморфизма антигенов.

Цель исследования - установить частоту АВО-несовместимых аллогенных трансплантаций ГСК в НМИЦ гематологии, определить молекулярными методами групповую принадлежность пациентов с ослабленной экспрессией антигенов и/или после множественных гемотрансфузий перед трансплантацией ГСК, уточнить группу крови доноров ГСК с ослабленной экспрессией антигенов.

Материалы и методы. Обследована кровь 270 пар реципиентов и доноров ГСК. Группу крови систем АВО, резус, MNS, Kell определяли в реакции агглютинации на плоскости с применением соответствующих цоликлонов класса иммуноглобулинов М и в гелевых картах. Генотипирование проводили методом полимеразной цепной реакции с праймерами для выявления генов систем АВО, резус, Kell, MNS.

Результаты. В 2018-2020 гг. в НМИц гематологии было выполнено 270 трансплантаций ГСК. у 141 (52,22 %) пары выявлена несовместимость донора и реципиента по системе АВО: большая - 23,33 %, малая - 20,0 %, бинаправленная - 8,89 %. проблемы оценки серологических результатов были у 97 (36,3 %) больных: у 78 с посттрансфузионным химеризмом и у 19 с ослабленной экспрессией антигенов; у 15 (5,56 %) доноров ГСК: у 4 из-за отсутствия сведений о группе крови при поступлении криоконсервированных клеток, у 10 вследствие ослабленной экспрессии антигенов, у 1 для поиска информативных маркеров мониторинга приживления ГСК. результаты исследования продемонстрировали, что процент агглютинированных эритроцитов при посттрансфузионном химеризме не может быть надежным критерием для установления истинного фенотипа пациента. у доноров и больных с ослабленной экспрессией антигенов подтверждено присутствие генов АВО*О1, -А1, -А2, -В1, RHD weak type 1, RHD weak type 2, RHD weak type 3, RHCE*C^w и впервые в России - ген RHCE*01.38.

Заключение. Отмечено преобладание АВО-несовместимых трансплантаций ГСк. проблемы с серологическим определением группы крови у трети больных перед трансплантацией ГСК возникали из-за наличия посттрансфузионного химеризма и ослабления экспрессии антигенов. Определение генотипа доноров ГСК необходимо при ослаблении экспрессии антигенов и поступлении криоконсервированных клеток. процент агглютинированных эритроцитов при посттрансфузионном химеризме не может быть надежным критерием для установления истинного фенотипа пациента. Обнаружение смешанного химеризма при определении групповых факторов крови серологическими методами является показанием к генотипированию, особенно в условиях преобладания несовместимых трансплантаций ГСК.

1. Савченко В.Г., Паровичникова Е.Н., Любимова Л.С. и др. Трансплантация костного мозга при острых миелоидных лейкозах. Терапевтический архив 1993;(7):7-15.

2. Савченко В.Г., Любимова Л.С., Паро-вичникова Е.Н. и др. Трансплантация аллогенных и аутологичных гемопоэтических стволовых клеток при острых лейкозах (итого 20-летнего опыта). Терапевтический архив 2007;(7):30-5.

3. Савченко В.Г. Протоколы трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток. М.: Практика, 2020. 320 с.

4. Афанасьев Б.В., Зубаровская Л.С. Роль трансплантации гемопоэтических стволовых клеток в терапии взрослых больных острыми лейкозами. Онкогематология 2006;(1-2):70-85.

5. Паровичникова Е.Н., Васильева В.А., Довыденко М.В. и др. Протоколы трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток. М., 2020. С. 218—224.

6. Фирсова М.В., Менделеева Л.П., Паро-вичникова Е.Н. и др. Трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток пациентам с множественной миеломой. Терапевтический архив 2021;93(7):778—4. DOI: 10.26442/00403660.2021.07.200929

7. Bug G., Serve H. Stem cell and cord blood transplantation — state of the art. ISBT Science Series 2010;5:317—23.

8. Васильева В.А., Кузьмина Л.А., Паро-вичникова Е.Н. и др. Выполнение трансплантаций аллогенных гемопоэтических стволовых клеток от неродственных доноров из российского и зарубежного регистров в одном трансплантационном центре. Гематология и трансфузиология 2020;65(3):299—311. DOI: 10.35754/0234-5730-2020-65-3299-311

9. Golovkina L.L. Influence of donor/s and recipient/s HPA-differencies on duration of aplasia after allomyelotransplantation. Bone Marro’ Transplantat 2011;46(S1):S324.

10. Eiz-Vesper B., Seltsam A., Blasczyk R. ABO glycosyltransferases as potential source of minor histocompatibility antigens in allogeneic peripheral blood progenitor cell transplantation. Transfusion 2005;45(6):960—8. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2005.04370.x

11. Sieff C., Bicknell D., Caine G. et al. Changes in cell surface antigen expression during hemopoietic differentiation. Blood 1982;60(3):703—13.

12. Kishino K., Muroi K., Ka’ano C. et al. Evaluation of engraftment by ABO genotyping analysis of erythroid burstforming units after bone marro’ transplantation. Leuk Res 2002;26(1):13—7. DOI: 10.1016/s0145-2126(01)00090-x

13. Booth G.S., Gehrie E.A., Bolan C.D., Savani B.N. Clinical guide to ABO-incompatible allogeneic stem cell transplantation. Biol Blood Marro’ Transplantant 2013;19(8):1152—8. DOI: 10.1016/j.bbmt.2013.03.018

14. Ho’s J., Beddo’ K., Gordon-Smith E. et al. Donor-derived red blood cell antibodies and immune hemolysis after allogeneic bone marro’ transplantation. Blood 1986;67(1):177—81.

15. Bolan C.D., Childs R.W., Procter J.L. et al. Massive immune haemolysis after allogeneic peripheral blood stem cell transplantation ’ith minor ABO incompatibility. Br J Haematol 2001;112(3):787—95. DOI: 10.1046/j.1365-2141.2001.02587.x

16. Worel N., Greinix H.T., Keil F. et al. Severe immune hemolysis after minor ABO-mismatched allogeneic peripheral blood progenitor cell transplantation occurs more frequently after nonmyelo-ablative than myeloablative conditioning. Transfusion 2002;42(10):1293—301. DOI: 10.1046/j.1537-2995.2002.00209.x

17. Franchini M., Gandini G., Aprili G. Non-ABO red blood cell alloantibodies follo’ing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. Bone Marro’ Transplantat 2004;33(12):1169—72. DOI: 10.1038/sj.bmt.1704524

18. Tomac G., Bojanic I., Mazic S. et al. Haemolysis, pure red cell aplasia and red cell antibody formation associated ’ith major and bidirectional ABO incompatible haematopoietic stem cell transplantation. Blood Transfus 2018;16(4):397—404. DOI: 10.2450/2017.0322-16

19. Lee J.H., Gulbis A., De Padua S.L. et al. Rituximab for passenger lymphocyte syndrome associated ’ith allogeneic SCT. Bone Marro’ Transplant 2008;42(1): 67—9. DOI: 10.1038/bmt.2008.79

20. Cid J., Lozano H.G., Flegel W.A. Matching for D antigen in haematopoietic progenitor cell transplantation: definition and clinical outcomes. Blood Transfus 2014;12(3):301—6. DOI: 10.2450/2014.0238-13

21. Головкина Л.Л., Стремоухова А.Г., Пушкина Т.Д. и др. Молекулярно-серологические характеристики типов слабого антигена D системы Резус. Терапевтический архив 2016;88(7):78—83. DOI: 10.17116/terarkh201688778-83

22. Golovkina L.L., Stremoukhova A., Vasiljeva M. et al. ABO*A and RHD variants in Russians. Vox Sanguinis 2017;112(suppl. 1):218 (Poster 494).

23. Головкина Л.Л., Каландаров Р.С., Пшеничникова О.С. и др. Выявление распространенных и новых редких типов слабого антигена RHD у больных с заболеваниями системы крови и здоровых лиц. Онкогематология 2019;14(3):52—9. DOI: 10.17650/1818-83462019-14-3-52-59

24. Головкина Л.Л., Сурин В.Л., Пшеничникова О.С. и др. Выявление аллельных вариантов антигена RHC у гематологических больных по результатам серологического и молекулярного исследований. Трансфузиология 2019;20(4):315—22.

25. Чумак А.А., Белякова В.В., Майорова О.А. и др. Идентификация групповых антигенов эритроцитов по системам АВО, RH и KEL серологическими тестами и методами генотипирования. Гематология и трансфузиология 2021;66(1):37—53. DOI: 10.35754/0234-57302021-66-1-37-53

26. Dykes J.H., Lindmark A., Lenhoff S. et al. Autologous del(20q)-positive erythroid progenitor cells, re-emerging after DLI treatment of an MDS patient relapsing after allo-SCT, can provide a normal peripheral red blood cell count. Bone Marro’ Transplantat 2004;33(5):559—63. DOI: 10.1038/sj.bmt.1704383

27. Golovkina L.L., Stremoukhova A., Vasiljeva M. et al. Erythrocyte's genomic in Russian multitransfused hematological patients. Haematologica 2016;101(s1):876—7.

28. Каландаров Р.С., Головкина Л.Л., Васильева М.Н. и др. Генотипирование групп крови систем АВО и Резус у пациентов после множественных гемотрансфузий. Онкогематология 2017;12(2):70—9. DOI: 10.17650/1818-83462017-12-2-70-79

29. Минеева Н.В., Кробинец И.И., Гавровская С.В. и др. Генотипирование групп крови эритроцитов для пациентов с множественными трансфузиями. Казанский медицинский журнал 2021;102(5):621—5. DOI: 10.17816/KMJ2021-621

30. Головкина Л.Л., Стремоухова А.Г., Пушкина Т.Д. и др. Молекулярно-генетические методы для определения групп крови эритроцитарных систем. Справочник заведующего КЛД 2018;(9):46-56.

31. Головкина Л.Л., Каландаров Р.С., Стремоухова А.Г. и др. Дифференциация подгрупп А1 и А2 антигена А системы АВО: биологическая основа и серологическая стратегия. Гематология и трансфузиология 2019;64(4):504-15. DOI: 10.35754/0234-5730-2019-64-4504-515