OncohematologyOncohematologyОнкогематология1818-83462413-4023Publishing House ABV Press37010.17650/1818-8346-2019-14-3-52-59BASIC RESEARCHФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕIdentification of common and new rare types of weak RhD antigen in patients with blood diseases and healthy personВыявление распространенных и новых редких типов сл абого антигена RhD у больных с заболеваниями системы крови и здоровых лицhttps://orcid.org/0000-0002-9423-2640GolovkinaL. L.ГоловкинаЛ. Л.
Russian Federation

4а Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

Лариса Леонидовна Головкина

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4а

 

largol@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7730-8367KalandarovR. S.КаландаровР. С.
Russian Federation

4а Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4а

https://orcid.org/0000-0001-5752-8146PshenichnikovaO. S.ПшеничниковаО. С.
Russian Federation

4а Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4а

https://orcid.org/0000-0002-1890-4492SurinV. L.СуринВ. Л.
Russian Federation

4а Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4а

https://orcid.org/0000-0002-1705-7535StremoukhovaA. G.СтремоуховаА. Г.
Russian Federation

4а Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4а

https://orcid.org/0000-0002-8801-5578PushkinaT. D.ПушкинаТ. Д.
Russian Federation

4а Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4а

https://orcid.org/0000-0002-3974-2189KhasigovaB. B.ХасиговаБ. Б.
Russian Federation

4а Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4а

National Research Center for Hematology, Ministry of Health of RussiaФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России2010201914352592010201920102019https://oncohematology.abvpress.ru/ongm/article/view/370

Background. Rhesus phenotype has been determined in 404 persons which have problems with blood groups identification. Genetic typing of antigen RhD variants was performed in 73 individuals. Objective of the work was to give molecular and serological characteristics of the antigen RhD weak types.

Materials and methods. Method of rhesus phenotype determination in direct agglutination test on plane by using of anti-D, anti-C, anti-c, anti-Cw, anti-E and anti-e monoclonal antibodies; gel method of rhesus phenotype determination; methods of genetic typing of RhD; methods of antigen RhD determination in the classic indirect antiglobulin test and in the gel indirect antiglobulin test; method of antigen RhD determination in the saline agglutination test.

Results. Serological methods identified 73 red blood samples with the weakened expression of RhD antigen. Molecular methods showed the reasons of weakness of antigen expression. Three RHD*D weak types which are common in Russians (RHD*D weak type 1–3) were identified and for the first time 3 types were found – RHD*D weak type 67, RHD(G255R) and RHD(JVS5-38del4). Serological characteristic of RhD weak types was given. It was shown that combined using of monoclonal antibodies in direct agglutination test and in gel is the most effective serological method of the antigen variants detection. Red blood cells with weak RhD antigens can be recognized by weakness or absence of agglutination with monoclonal antibodies on plane if agglutination in gel was 3+4+.

Conclusion. Concrete weak RhD variants can be determined only by genetic typing. Serologically weak antigen variants can be detected by using of at least two series of monoclonal antibodies or by using of two different methods (it is preferable).

Введение. Фенотип системы Резус определен у 404 лиц с проблемами в идентификации групповой принадлежности. Генетическое типирование вариантов антигена RhD выполнено 73 индивидуумам.

Цель исследования – дать молекулярно-серологическую характеристику слабых вариантов антигена RhD системы Резус.

Материалы и методы. Использовали следующие методы: метод определения резус-фенотипа в прямой агглютинации на плоскости с применением Цоликлонов анти-D, анти-С, анти-с, анти-Сw, анти-Е и анти-e; гелевый метод определения резус-фенотипа; методы генетического типирования антигена RhD; методы определения антигена RhD в непрямой пробе Кумбса в классическом варианте и в геле; метод определения антигена RhD в агглютинации в солевой среде.

Результаты. Серологическими методами выявлено 73 образца эритроцитов с ослабленным антигеном RhD. Молекулярными методами определены причины ослабления экспрессии антигена: идентифицировано 3 типа слабого антигена RhD, часто встречающихся у россиян (RHD*D weak type 1–3), и впервые выявлены еще 3 типа – RHD*D weak type 67, RHD(G255R) и RHD(JVS538del4). Дана серологическая характеристика разных типов слабого антигена RhD. Показано, что предположить присутствие вариантных антигенов можно по расхождению результатов в методах прямой агглютинации с Цоликлонами и в геле. Эритроциты со слабыми антигенами RhD можно распознать по ослаблению или отсутствию агглютинации с Цоликлоном анти-D и силе реакции в гелевом методе на 3+…4+.

Заключение. Конкретные типы слабого антигена RhD могут быть установлены только при генетическом исследовании. Серологически слабые варианты антигенов могут быть выявлены при использовании моноклональных антител как минимум 2 серий или, что предпочтительнее, применением 2 разных методик.

RHD genegenetic typingdirect sequencingweak type RhD antigenindirect Coombs testsaline agglutination testgel methodген RHDгенетическое типированиетип слабого антигена RhDЦоликлоннепрямая проба Кумбсареакция агглютинации в солевой средегелевый методScott M.L. The complexities of the Rh system. Vox Sang 2004;87(suppl. 1):S58‒62. DOI: 10.1111/j.1741-6892.2004.00431.xBeckers E.A., Faas B.H., von der Borne A.E. et al. The R0Har Rh:33 phenotype results from substitution of exon 5 of the RHCE gene by corresponding exon of the RHD gene. Br J Haematol 1996;92(3):751‒7. DOI: 10.1046/j.1365-2141.1996.382918.x.Scott M. Section 1A. Rh serology. Coordinator’s report. Transfus Clin Biol 2002;9(1):23–9. DOI: 10.1016/S12467820(01)00211-7.Daniels G. Variants of RhD – current testing and clinical consequences. Br J Haematol 2013;161(4):461‒70. DOI: 10.1111/bjh.12275.Kwon D.H., Sandler S.G., Flegel W.A. DEL phenotype. Immunohematology 2017;33(3):125‒32.Stratton F. A new Rh allelomorph. Nature 1946;158:25‒6. DOI: 10.1038/158025c0.Agre P.C., Davies D.M., Issit P.D. et al. A proposal to standardize terminology for weak D antigen. Transfusion 1992;32(1):86‒7. DOI: 10.1046/j.1537-2995.1992.32192116441.x.Rhesus base website, http://www.uniulm.de/fwagner/RH/RB.Wagner F.F., Gassner C., Muller T.H. et al. Molecular basis of weak D phenotypes. Blood 1999;93(1):385‒93.Avent N.D., Madgett T.E., Lee Z.E. et al. Molecular biology of Rh protein and relevance to molecular medicine. Expert Rev Mol Med 2006;8(13):1‒20. DOI: 10.1017/S1462399406010969.Wagner F.F., Frohmajer A., Ladewig B. et al. Weak D alleles express distinct phenotypes. Blood 2000;95(8):2699–708. DOI: 10.1016/S0887-7963(01)80057-2.Wagner F.F., Flegel W.A. RHD gene deletion occurred in the Rhesus box. Blood 2000;95(12):3662‒8. DOI: 10.1016/S08877963(01)80058-4.Flegel W.A., Wagner F.F. Molecular genetics of RH. Vox Sang 2000;78(Suppl 2):109‒15.Flegel W.A., von Zabern I., Doescher A. et al. D variants at the RhD vestibule in the weak D type 4 and Eurasian D clusters. Transfusion 2009;49(6):1059‒69. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2009.02102.x.Wagner F.F., Ladewig B., Angert K.S. et al. The DAU allele cluster of the RHD gene. Blood 2002;100(1):306‒11. DOI: 10.1182/blood-2002-01-0320.Wagner T., Kormoczi G.F., Buchta C. et al. Anti-D immunization by DEL red blood cells. Transfusion 2005;45(4):520‒6. DOI: 10.1111/j.0041-1132.2005.04256.x.Dogic V., Bingulac-Popovic J., Babic I. et al. Distribution of weak D types in Croation population. Transfus Med 2011;21(4):278‒9. DOI: 10.1111/j.1365-3148.2011.01071.x.Rodrigues M.J., Rodrigues F., Tilley L. et al. Several new examples of weak D type 38 in the Portuguese population. Transfusion 2006;46(suppl.):141A‒2A (abstract). DOI: 10.1111/j.1537-995.2006.01023_1.x.St-Louis M., Richard M., Cote M. et al. Weak D type 42 cases found in individuals of European descent. Immunohematology 2011;27(1):20‒4.Golovkina L.L., Stremoukhova A.G., Pushkina T.D. et al. Molecular-serological characteristics of weak D antigen types of Rhesus system. Terapevticheskiy arkhiv = Therapeutic Archive 2016;88:78–83. (In Russ.). DOI: 10.17116/terarkh201688778-83.Головкина Л.Л., Стремоухова А.Г., Пушкина Т.Д. и др. Молекулярносерологические характеристики типов слабого антигена D системы Резус. Терапевтический архив 2016;88:78‒83. DOI: 10.17116/terarkh201688778-83.. Golovkina L.L., Stremoukhova A.G., Pushkina T.D. et al. Case of exposure of Rhesus system antigen weak D type 15. Hematologiya i transfuziologiya = Hematology and Transfusiology 2014;59(4):23‒4. (In Russ.).Головкина Л.Л., Стремоухова А.Г., Пушкина Т.Д. и др. Случай выявления антигена системы Резус – Dweak 15-го типа. Гематология и трансфузиология 2014;59(4):23‒4.Golovkina L.L., Stremoukhova A.G., Pushkina T.D. et al. Case of exposure of Rhesus system antigen weak D type 4.2 (category DAR). Onkoghematologiya = Oncohematology 2015;10(3):70‒2. (In Russ.). DOI: 10.17650/18188346-2015-10-3-70-72.Головкина Л.Л., Стремоухова А.Г., Пушкина Т.Д. и др. Случай выявления антигена weak D type 4.2 (категория DAR) системы Резус. Онкогематология 2015;10(3):70‒2. DOI: 10.17650/18188346-2015-10-3-70-72.Wagner T., Koermoeczi G.F., Buchta G. et al. Anti-D immunization by DEL red blood cells. Transfusion 2005;45(4):520‒6. DOI: 10.1111/j.0041-1132.2005.04256.x.Mollison P.L., Engelfriet C.P., Contreras M. Blood transfusion in clinical medicine. 10th edn. Oxford: Blackwell Science, 1997.von Zabern I., Flegel W.A. IVS5-38del4 deletion in the RHD gene does not cause a DEL phenotype: relevance for RHD alleles including DFR-3. Transfusion 2007;47(8):1552‒5. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2007.01353.x.Fichou Y., Le Marechal C., Jamet D. et al. Establishment of a medium-throughput approach for the genotyping of RHD variants and report of nine novel rare alleles. Transfusion 2013;53(8):1821‒8. DOI: 10.1111/trf.12009.Sandler S.G., Flegel W.A., Westhoff C.M. et al. It’s time to phase in RHD genotyping for patients with serologic weak D phenotype. Transfusion 2015;55(3):680‒9. DOI: 10.1111/trf.12941.Standards for blood banks and transfusion service. 29th edn. Ed.: J. Levitt. Bethesda (MD): American Association of Blood Banks, 2014.