OncohematologyOncohematologyОнкогематология1818-83462413-4023Publishing House ABV Press36910.17650/1818-8346-2019-14-3-38-51BASIC RESEARCHФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕDetection of platelet-associated immunoglobulins and complement system components in patients with aplastic anemia and hemoblastosisДетекция тромбоцитассоциированных иммуноглобулинов и компонентов системы комплемент а у больных апластической анемией и гемобластозамиhttps://orcid.org/0000-0002-1568-0999RakhmaniA. F.РахманиА. Ф.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

Анжелика Фаридовна Рахмани

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

angelique.r86@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2449-2682MikhaylovaE. A.МихайловаЕ. А.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

https://orcid.org/0000-0002-8490-6066GaltsevaI. V.ГальцеваИ. В.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

DavidovaYu. O.ДавыдоваЮ. О.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

KapranovN. M.КапрановН. М.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

https://orcid.org/0000-0001-5347-0127DubinkinI. V.ДубинкинИ. В.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167, 

1 Ostrovityanova St., Moscow 117997, 

Build 1, 2 / 1 Barrikadnaya St., Moscow 125993

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4, 

117997 Москва, ул. Островитянова, 1, 

125993 Москва, ул. Баррикадная, 2 / 1, стр. 1

KulikovS. M.КуликовС. М.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

https://orcid.org/0000-0002-9684-5045GaponovaT. V.ГапоноваТ. В.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

https://orcid.org/0000-0003-0934-6094FidarovaZ. T.ФидароваЗ. Т.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

https://orcid.org/0000-0002-4827-8947TroitskayaV. V.ТроицкаяВ. В.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

https://orcid.org/0000-0001-6177-3566ParovichnikovaE. N.ПаровичниковаЕ. Н.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

https://orcid.org/0000-0001-8188-5557SavchenkoV. G.СавченкоВ. Г.
Russian Federation

4 Novyy Zykovskiy Proezd, Moscow 125167

125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4

National Research Center for Hematology, Ministry of Health of RussiaФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава РоссииN.I. Pirogov Russian National Research Medical University, Ministry of Health of RussiaФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава РоссииRussian Medical Academy of Continuing Professional Education, Ministry of Health of RussiaФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России2010201914338512010201920102019https://oncohematology.abvpress.ru/ongm/article/view/369

Background. In addition to anti-HLA-I and anti-HPA-antibodies and specific cytotoxic T-lymphocytes, another cause of immune refractoriness to donor's platelet transfusions could be a platelet-associated different classes immunoglobulins PAIg (G, M, A) and C3 / C4‑components of complement system (PAC3, PAC4). These markers can be detected by flow cytofluorometry of double-stained platelets. The fixation density of immunoglobulins and components of complement systems were measured by the mean fluorescence intensity (MFI).

Objective: to study additional factors that aggravate the course of refractoriness to donor's platelet transfusions in patients with aplastic anemia (AA) and hemoblastosis.

Materials and methods. 77 patients (AA – 47, myelodysplastic syndrome (MDS) – 10, acute myeloid leukemia (AML) – 20) admitted to National Research Centre for Hematology during 11.09.2016–04.28.2018 were enrolled in the study. M / f ratio was 33 / 44, median age was 36 yrs. (19–71 yrs.). Plasmapheresis and cross-matching for PRP selection were used for patients with refractoriness to donor's platelet transfusion. PAIg (G, M, A) and PAC3 / C4 detection and density (MFI) were evaluated in all patients by flow cytofluorometry of doublestained platelets (CD41a-PE; IgA, M, G-FITC; C3 / C4‑FITC) and MFI measurement. Patients with AA were investigated on different stages of therapy and if refractoriness to donor's platelet transfusion is developed. Blood donors (n = 28) MFI measurement results were established as negative control.

Results. It was found that MFI PAIgG/M/А and PAC3/С4 was higher in all groups of the patients (АА, MDS, AML), as compared with donors. MFI of PAIgM and PAIgA in patients were significant higher than MFI of PAIgG and PAC3 / C4. Combination of PAIgM / A, PAIgM / C3 / C4 and PAIgA / C3 / C4 were more frequent. Multiple transfusions of PRP were associated with PAIgA and PAC3 detection. Development of refractoriness to donor's platelet transfusions was accompanied by alloantibodies (HLA-I, HPA) and PAIgM, PAC4 detection. In patients of AA group during development of refractoriness to donor's platelet transfusions and multiple infection complications the high density of PAIgM and PAIgA were identified. Relapse of AA was accompanied MFI of PAC3 density increment.

Conclusion. In addition to application of a certain transfusion therapy algorithm it is also necessary to detect PAIg (G, M, A) and PAC3 / C4 for prediction of severe refractoriness to donor's platelet transfusions.

Введение. При развитии иммунологической рефрактерности к трансфузиям донорских тромбоцитов наряду с антитромбоцитарными (анти-HLA и анти-HPA) аллоантителами, а также специфическими цитотоксическими Т-лимфоцитами могут вырабатываться дополнительные маркеры, такие как тромбоцитассоциированные иммуноглобулины (PAIgG / M / A) и компоненты системы комплемента (PAC3 / C4), что может способствовать повышенному разрушению тромбоцитов при трансфузиях и усугублять рефрактерность. Эти маркеры можно выявить с помощью двойного окрашивания тромбоцитов в реакции прямой поверхностной иммунофлуоресценции и последующим детектированием методом проточной цитометрии.

Цель исследования – изучить дополнительные факторы, усугубляющие течение рефрактерности к трансфузиям донорских тромбоцитов у больных апластической анемией (AA) и гемобластозами.

Материалы и методы. С 9 ноября 2016 г. по 28 апреля 2018 г. в клиниках центра наблюдались 77 больных в возрасте 19–71 года (медиана – 36 лет), среди них мужчин – 33, женщин – 44. Распределение больных: АА – 47 (61 %); миелодиспластический синдром (МДС) – 10 (13 %); острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) – 20 (26 %). Во всех группах больных проводили определение PAIgG / M / A, PAC3 / C4 и сравнительный анализ плотности фиксации по средней интенсивности флуоресценции (СИФ) с помощью двойного окрашивания (CD41a-PE; IgA, M, G-FITC; C3 / C4‑FITC). Характеристика PAIgG / M / A и PAC3 / C4 подробно изучалась в группе больных АА на разных этапах терапии и при развитии рефрактерности к трансфузиям донорских тромбоцитов. В качестве отрицательного контроля плотности фиксации иммуноглобулинов и компонентов системы комплемента на тромбоцитах проанализированы данные 28 здоровых доноров.

Результаты. Обнаружено, что СИФ PAIgG/M/А и PAC3/С4 была выше во всех группах больных (АА, МДС, ОМЛ) по сравнению с донорами. В группах больных АА, ОМЛ, МДС выявляется высокая плотность фиксации на поверхности тромбоцитов PAIgM и PAIgА, а также сочетание PAIgM / A, PAIgM / С3 / С4 и PAIgА / С3 / С4. Постоянная трансфузионная нагрузка сопровождается появлением PAIgА и PAС3, а при развитии аллоиммунизации и рефрактерности к трансфузиям появляются также PAIgM и PAС4. Среди больных АА на фоне постоянной трансфузионной нагрузки с развитием рефрактерности к трансфузиям донорских тромбоцитов, а также при множественных инфекционных осложнениях обнаруживается высокая плотность фиксации PAIgM, PAIgА, а при рецидиве АА наблюдалось повышение СИФ PAС3.

Заключение. В дополнение к применению определенного алгоритма трансфузионной терапии также необходимо осуществлять определение PAIgG / M / A и PAC3 / C4 для прогнозирования усиления рефрактерности к трансфузиям донорских тромбоцитов.

refractoriness to donor's platelet transfusionsdetection of platelet-associated immunoglobulins and complement system componentsmean fluorescence intensityplatelet concentrate transfusionрефрактерность к трансфузиям донорских тромбоцитовопределение тромбоцитассоциированных иммуноглобулинов и компонентов системы комплементасредняя интенсивность флуоресценциитрансфузия концентратов тромбоцитовSavchenko V.G. Diagnostic algorithms and treatment protocols for blood diseases. Moscow: Praktika, 2018. Рр. 1006‒1255. (In Russ.).Савченко В.Г. Алгоритмы диагностики и протоколы лечения заболеваний системы крови в 2 томах. М.: Практика, 2018. С. 1006–1255.Corazza M. Hranchook M. Massive blood transfusion therapy. AANA J 2000;68(4):311–4.Fletcher C.H., DomBourian M.G., Millward P.A. Platelet transfusion for patients with cancer. Cancer Control 2015;22(1):47–51. DOI: 10.1177/107327481502200107.Zotikov E.A., Babaeva A.G., Golovkina L.L. Platelets and antiplatelet antibodies. Moscow: Monolit, 2003. 125 p. (In Russ.).Зотиков Е.А., Бабаева А.Г., Головкина Л.Л. Тромбоциты и антитромбоцитарные антитела. М.: Монолит, 2003. 125 с.Rakhmani A.F., Mikhailova E.A., Dubinkin I.V. et al. Refractoriness to donor platelets transfusion in patients with aplastic anemia and hemoblastosis. Onkogematologiya = Oncohematology 2018;13(2):62‒72. (In Russ). DOI: 10.17650/18188346-2018-13-2-62-72.Рахмани А.Ф., Михайлова Е.А., Дубинкин И.В. и др. Рефрактерность к трансфузиям донорских тромбоцитов у больных апластической анемией и гемобластозами. Онкогематология 2018;13(2):62–72. DOI: 10.17650/18188346-2018-13-2-62-72.Hod E., Schwartz J. Platelet transfusion refractoriness. Br J Haematol 2008;142(3):348–60. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2008.07189.x.Forest S.K., Hod E.A. Management of the platelet refractory patient. Hematol Oncol Clin North Am 2016;30(3):665–77. DOI: 10.1016/j.hoc.2016.01.008.Kiefel V., Konig C., Kroll H., Santoso S. Platelet alloantibodies in transfused patients. Transfusion 2001;41(6):766–70. DOI:10.1046/j.15372995.2001.41060766.x.Mazurov A.V. Platelet physiology and pathology. Moscow: Litterra, 2011. 456 p. (In Russ.).Мазуров А.В. Физиология и патология тромбоцитов. М.: Литтерра, 2011. 456 с.Wallington T. Essential immunology for transfusion medicine. In: Practical Transfusion Medicine, 3rd edn. Eds.: M.F. Murphy, D.H. Pamphilon. Blackwell Publishing Ltd, 2009. DOI: 10.1002/9781444311761.ch2.Sayyadi M., Shaiega M., Zarif M. et al. Platelet transfusion outcome and flow cytometric monocyte phagocytic assay (FMPA). Arch Iran Med 2016;19(6):426– 9. DOI: 0161906/AIM.0010.He Y., Zhao Y.X., Zhu M.Q. et al. Detection of autoantibodies against platelet glycoproteins in patients with immune thrombocytopenic purpura by flow cytometric immunobead array. Clin Chim Acta 2013;415:176–80. DOI: 10.1016/j.cca.2012.10.035.Huh H.J., Park C.J., Kim S.W. et al. Flow cytometric detection of platelet-associated immunoglobulin in patients with immune thrombocytopenic purpura and nonimmune thrombocytopenia. Ann Clin Lab Sci 2009;39(3):283–8.Romero-Guzmán L.T., López-Karpovitch X., Paredes R. et al. Detection of plateletassociated immunoglobulins by flow cytometry for the diagnosis of immune thrombocytopenia: a prospective study and critical review. Haematologica 2000;85(6):627–31.Peerschke E.I., Yin W., Ghebrehiwet B. Platelet mediated complement activation. Adv Exp Med Biol 2008;632:81–91. DOI: 10.1007/978-0-387-78952-1_7.Kiefel V., Freitag E., Kroll H., Santoso S. et al. Platelet autoantibodies (IgG, IgM, IgA) against glycoproteins IIb/IIIa and Ib/ IX in patients with thrombocytopenia. Ann Hematol 1996;72(4):280–5.Myers T., Kim B., Steiner M., Baldini M. Platelet-associated complement C3 in immune thrombocytopenic purpura. Blood 1982;59(5):1023–8.Panzer S., Szamait S., Bödeker R.H. et al. Platelet-associated immunoglobulins IgG, IgM, IgA and complement C3 in immune and nonimmune thrombocytopenic disorders. Am J Hematol 1986;23(2):89– 99. DOI: 10.1002/ajh.2830230203.Andrews R.K., Gardiner E.E. Basic mechanisms of platelet receptor shedding. Platelets 2017;28(4):319–24. DOI: 10.1080/09537104.2016.1235690.Bender M., Stegner D., Nieswandt B. Model systems for platelet receptor shedding. Platelets 2017;28(4):325–32. DOI: 10.1080/09537104.2016.1195491.Gardiner E.E., Al-Tamimi M., Andrews R.K., Berndt M.C. Platelet receptor shedding. Methods Mol Biol 2012;788:321–39. DOI: 10.1007/978-161779-307-3_22.Manis J.P., Silberstein L.E. Platelet refractoriness: It’s not the B-all and endall. Blood 2016;127(14):1740–1. DOI: 10.1182/blood-2016-02-695437.Mikhailova E.A. Program treatment of aplastic anemia patients. In: V.G. Savchenko, E.A. Mikhailova, E.N. Ustinova, G.A. Klyasova. Program treatment of leukemia. Moscow: Praktika, 2018. Рр. 328-342. (In Russ.).Михайлова Е.А. Программное лечение больных апластической анемией. В кн.: В.Г. Савченко, Е.А. Михайлова, Е.Н. Устинова, Г.А. Клясова. Программное лечение лейкозов. М.: Практика, 2018. С. 328–342.Killick S., Bown N., Cavenagh J. et al. Guidelines for the diagnosis and management of adult aplastic anaemia. Br J Haematol 2016;172(2):187–207. DOI: 10.1111/bjh.13853.Bevans M.F., Shalabi R.A. Management of patients receiving antithymocyte globulin for aplastic anemia and myelodysplastic syndrome. Clin J Oncol Nurs 2004;8(4):377–82. DOI: 10.1188/04.CJON.377-382.Cheson B.D., Bennett J.M., Kopecky K.J. et al. Revised recommendations of the International Working Group for diagnosis, standardization of response criteria, treatment outcomes, and reporting standards for therapeutic trials in acute myeloid leukemia. J Clin Oncol 2003;21(24):4642–9. DOI: 10.1200/JCO.2004.99.116.Carubbi C., Masselli E., Gesi M. et al. Cytofluorimetric platelet analysis. Semin Thromb Hemost 2014;40(1):88–98. DOI: 10.1055/s-0033-1363472.Sarkar R.S., Philip J., Jain N. Detection and identification of platelet-associated alloantibodies by a solid-phase modified antigen capture elisa (MACE) technique and its correlation to platelet refractoriness in multi platelet concentrate transfused patients. Indian J Hematol Blood Transfus 2015;31(1):77–84. DOI: 10.1007/s12288014-0374-4.