OncohematologyOncohematologyОнкогематология1818-83462413-4023Publishing House ABV Press32510.17650/1818-8346-2019-13-4-93-103BASIC RESEARCHФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕFlow cytometric analysis of leukemic blast cells in pediatric B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia with translocation t(12;21)(p13;q22)/ETV6-RUNX1Особенности иммунофенотипа опухолевых клеток у детей с острым лимфобластным лейкозом и наличием транслокации t(12;21)(p13;q22)/ETV6-RUNX1https://orcid.org/0000-0003-1904-4989PermikinZh. V.ПермикинЖ. В.
Russian Federation

3 Repina St., Ekaterinburg 620030, 

32 Serafimy Deryabinoy St., Ekaterinburg 620149

620028 Екатеринбург, ул. Репина, 3; 620149 Екатеринбург, ул. Серафимы Дерябиной, 32

https://orcid.org/0000-0002-0889-6986PopovA. M.ПоповА. М.
Russian Federation

1 Samory Mashela St., Moscow 117997

Александр Михайлович Попов 

117997 Москва, ул. Саморы Машела, 1

uralcytometry@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-9329-1828VerzhbitskayaT. Yu.ВержбицкаяТ. Ю.
Russian Federation

32 Serafimy Deryabinoy St., Ekaterinburg 620149, 

22a Karla Marksa St., Ekaterinburg 620026

620149 Екатеринбург, ул. Серафимы Дерябиной, 32; 620026 Екатеринбург, ул. Карла Маркса, 22а

RigerТ. О.РигерТ. О.
Russian Federation

32 Serafimy Deryabinoy St., Ekaterinburg 620149, 

22a Karla Marksa St., Ekaterinburg 620026

620149 Екатеринбург, ул. Серафимы Дерябиной, 32; 620026 Екатеринбург, ул. Карла Маркса, 22а

ArakaevO. R.АракаевО. Р.
Russian Federation

32 Serafimy Deryabinoy St., Ekaterinburg 620149, 

22a Karla Marksa St., Ekaterinburg 620026

620149 Екатеринбург, ул. Серафимы Дерябиной, 32; 620026 Екатеринбург, ул. Карла Маркса, 22а

VlasovaA. A.ВласоваА. А.
Russian Federation

32 Serafimy Deryabinoy St., Ekaterinburg 620149

620149 Екатеринбург, ул. Серафимы Дерябиной, 32

https://orcid.org/0000-0002-2352-7716OlshanskayaYu. V.ОльшанскаяЮ. В.
Russian Federation

1 Samory Mashela St., Moscow 117997

117997 Москва, ул. Саморы Машела, 1

https://orcid.org/0000-0002-1085-4646KazakovaA. N.КазаковаА. Н.
Russian Federation

1 Samory Mashela St., Moscow 117997

117997 Москва, ул. Саморы Машела, 1

https://orcid.org/0000-0003-0185-0050TsvirenkoS. V.ЦвиренкоС. В.
Russian Federation

3 Repina St., Ekaterinburg 620030, 

32 Serafimy Deryabinoy St., Ekaterinburg 620149

620028 Екатеринбург, ул. Репина, 3; 620149 Екатеринбург, ул. Серафимы Дерябиной, 32

https://orcid.org/0000-0002-5180-6560SavelievL. I.СавельевЛ. И.
Russian Federation

3 Repina St., Ekaterinburg 620030, 

32 Serafimy Deryabinoy St., Ekaterinburg 620149; 

22a Karla Marksa St., Ekaterinburg 620026

620028 Екатеринбург, ул. Репина, 3;

620149 Екатеринбург, ул. Серафимы Дерябиной, 32; 

620026 Екатеринбург, ул. Карла Маркса, 22а

https://orcid.org/0000-0002-9881-6221TsaurG. A.ЦаурГ. А.
Russian Federation

3 Repina St., Ekaterinburg 620030, 

32 Serafimy Deryabinoy St., Ekaterinburg 620149; 

22a Karla Marksa St., Ekaterinburg 620026; 

106 Pervomayskaya St., Ekaterinburg 620049

620028 Екатеринбург, ул. Репина, 3;

620149 Екатеринбург, ул. Серафимы Дерябиной, 32; 

620026 Екатеринбург, ул. Карла Маркса, 22а; 

620049 Екатеринбург, ул. Первомайская, 106

https://orcid.org/0000-0002-1885-3912FechinaL. G.ФечинаЛ. Г.
Russian Federation

32 Serafimy Deryabinoy St., Ekaterinburg 620149, 

22a Karla Marksa St., Ekaterinburg 620026

620149 Екатеринбург, ул. Серафимы Дерябиной, 32; 620026 Екатеринбург, ул. Карла Маркса, 22а

Ural State Medical UniversityФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава РоссииRegional Children’s HospitalГАУЗ СО «Областная детская клиническая больница»Dmitriy Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and ImmunologyФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева» Минздрава РоссииResearch Institute of Medical Cell TechnologiesГАУЗ СО «Институт медицинских клеточных технологий»Institute of Immunology and Physiology of the Ural Branch of the Russian Academy of SciencesФГБУН «Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения РАН»031220181349310302012019020120192018https://oncohematology.abvpress.ru/ongm/article/view/325

The objective of the study was searching for surface antigen expression that could predict presence of translocation t(12;21)(p13;q22)/ETV6RUNX1 in pediatric B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia patients.

Results . ETV6-RUNX1 fusion gene transcript was revealed in 118 (22.4 %) out of 526 children with B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia. Leukemic blast cells in ETV6-RUNX1-positive patients more frequently had high CD10 expression, myeloid markers co-expression , including CD13, CD33, CD117, and absence of CD20 than in ETV6-RUNX1-negative ones. Nevertheless diagnostic test performance characteristics of each single parameter was not strong enough for predicting the presence of translocation t(12;21)(p13;q22)/ETV6-RUNX1.

Conclusion . Thus application of conventional set of immunological markers does not allow reliable distinguishing this patients’ subgroup. However antibodies panel enlargement, high degree of flow cytometry standardization and additional analytical methods can potentially improve applicability of antigen profile analysis for separation of patients with translocation t(12;21)(p13;q22)/ETV6-RUNX1.

Цель исследования – поиск иммунофенотипических маркеров для прогнозирования наличия транслокации t(12;21)(p13;q22)/ETV6-RUNX1. 

Результаты . Транслокация t(12;21)(p13;q22)/ETV6-RUNX1 была обнаружена у 118 (22,4 %) из 526 обследованных пациентов с острым лимфобластным лейкозом из В-линейных предшественников. Опухолевые бласты пациентов с транслокацией t(12;21) (p13;q22)/ETV6-RUNX1 достоверно чаще имели высокую экспрессию CD10, а также коэкспрессию миелоидных маркеров CD13, CD33 и CD117. Для них также было типично отсутствие экспрессии CD20. В то же время полученные нами результаты не позволили найти отдельный иммунофенотипический маркер, который с высокой долей достоверности мог бы предсказывать наличие t(12;21)(p13;q22)/ETV6-RUNX1.

Заключение . Таким образом, применение стандартного перечня иммунологических маркеров не позволяет уверенно выделить данную группу пациентов. Однако расширение диагностической панели, высокий уровень стандартизации проточной цитометрии и дополнительные методы анализа цитометрических данных могут позволить достаточно точное выявление пациентов, относящихся к этой клинически значимой подгруппе.

acute lymphoblastic leukemiaimmunophenotypetranslocation t(1221)(p13q22)острый лимфобластный лейкозиммунофенотипированиетранслокация t(1221)(p13q22)Romana S.P., Le Coniat M., Berger R. t(12;21): a new recurrent translocation in acute lymphoblastic leukemia. Genes Chromosomes Cancer 1994;9(3):186–91. PMID: 7515661.Golub T., Barker G., Bohlander S. et al. Fusion of the TEL gene on 12p13 to the AML1 gene on 21q22 in acute lymphoblastic leukemia. Proc Natl Acad Sci USA 1995;92(11):4917–21. PMID: 7761424.Romana S.P., Mauchauffe M., Le Coniat M. et al. The t(12;21) of acute lymphoblastic leukemia results in a telAML1 gene fusion. Blood 1995;85(12):3662–70. PMID: 7780150.Shurtleff S., Buijs A., Behm F. et al. TEL/AML1 fusion resulting from a cryptic t(12;21) is the most common genetic lesion in pediatric ALL and defines a subgroup of patients with an excellent prognosis. Leukemia 1995;9(12):1985–9. PMID: 8609706.Borkhardt A., Cazzaniga G., Viehmann S. et al. Incidence and clinical relevance of TEL/AML1 fusion genes in children with acute lymphoblastic leukemia enrolled in the German and Italian multicenter therapy trials. Blood 1997;90(2):571–7. PMID: 9226156.Kobayashi H., Rowley J. Identification of cytogenetically undetected 12p13 translocations and associated deletions with fluorescence in situ hybridization. Genes Chromosomes Cancer 1995;12(1):66–9. PMID: 7534114.Moricke A., Zimmermann M., Reiter A. et al. Long-term results of five consecutive trials in childhood acute lymphoblastic leukemia performed by the ALL-BFM study group from 1981 to 2000. Leukemia 2010;24(2):265–84. DOI: 10.1038/leu.2009.257. PMID: 20010625.Moorman A., Ensor H., Richards S. et al. Prognostic effect of chromosomal abnormalities in childhood B-cell precursor acute lymphoblastic leukaemia: results from the UK Medical Research Council ALL97/99 randomised trial. Lancet Oncol 2010;11(5):429–38. DOI: 10.1016/S1470-2045(10)70066–8. PMID: 20409752.Loh M., Goldwasser M., Silverman L. et al. Prospective analysis of TEL/AML1positive patients treated on Dana-Farber Cancer Institute Consortium Protocol 95– 01. Blood 2006;107(11):4508–13. DOI: 10.1182/blood-2005-08-3451. PMID: 16493009.Forestier E., Heyman M., Andersen M.K. et al. Outcome of ETV6/RUNX1-positive childhood acute lymphoblastic leukaemia in the NOPHO-ALL-1992 protocol: frequent late relapses but good overall survival. Br J Haematol 2008;140(6):665–72. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2008.06980.x. PMID: 18241254.Bhojwani D., Pei D., Sandlund J. et al. ETV6-RUNX1-positive childhood acute lymphoblastic leukemia: improved outcome with contemporary therapy. Leukemia 2012;26(2):265–70. DOI: 10.1038/leu.2011.227. PMID: 21869842.Kato M., Ishimaru S., Seki M. et al. Longterm outcome of 6-month maintenance chemotherapy for acute lymphoblastic leukemia in children. Leukemia 2017;31(3):580–4. DOI: 10.1038/leu.2016.274. PMID: 27698447.Borowitz M., Rubnitz K., Nash M. et al. Surface antigen phenotype can predict TEL-AML1 rearrangement in childhood B-precursor ALL: a Pediatric Oncology Group study. Leukemia 1998;12(11):1764–70. PMID: 9823952.Gandemer V., Aubry M., Roussel M. et al. CD9 expression can be used to predict childhood TEL/AML1-positive acute lymphoblastic leukemia: proposal for an accelerated diagnostic flowchart. Leuk Res 2010;34(4):430–7. DOI: 10.1016/j.leukres.2009.09.033. PMID: 19896186.Kiyokawa N., Iijima K., Tomita O. et al. Significance of CD66c expression in childhood acute lymphoblastic leukemia. Leuk Res 2014;38(1):42–8. DOI: 10.1016/j.leukres.2013.10.008. PMID: 24231528.van Dongen J., Lhermitte L., Boettcher S. et al. EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes. Leukemia 2012;26(9):1908–75. DOI: 10.1038/leu.2012.120. PMID: 22552007.Kalina T., Vaskova M., Mejstrikova E. et al. Myeloid antigens in childhood lymphoblastic leukemia: clinical data point to regulation of CD66c distinct from other myeloid antigens. BMC Cancer 2005;5:38. DOI: 10.1186/1471-2407-5-38. PMID: 15826304.Zaliova M., Kotrova M., Bresolin S. et al. ETV6/RUNX1-like acute lymphoblastic leukemia: a novel B-cell precursor leukemia subtype associated with the CD27/CD44 immunophenotype. Genes Chromosomes Cancer 2017;56(8):608–16. DOI: 10.1002/gcc.22464. PMID: 28395118.Vaskova M., Mejstrikova E., Kalina T. et al. Transfer of genomics information to flow cytometry: expression of CD27 and CD44 discriminates subtypes of acute lymphoblastic leukemia. Leukemia 2005;19(5):876–8. DOI: 10.1038/sj.leu.2403706. PMID: 15759032.Dworzak M.N., Buldini B., Gaipa G. et al. AIEOP-BFM consensus guidelines 2016 for flow cytometric immunophenotyping of Pediatric acute lymphoblastic leukemia. Cytometry B Clin Cytom 2018;94(1):82–93. DOI: 10.1002/cyto.b.21518. PMID: 28187514.Novikova I.A., Verzhbitskaya T.Y., Movchan L.V. et al. Russian-Belarusian multicenter group standard guidelines for childhood acute lymphoblastic leukemia flow cytometric diagnostics. Onkogematologiya = Oncohematology 2018;13(1):73–82. (In Russ.). DOI: 10.17650/1818-8346-2018-13-1-73-82.Новикова И.А., Вержбицкая Т.Ю., Мовчан Л.В. и др. Стандарт российскобелорусской кооперативной группы по иммунофенотипированию острого лимфобластного лейкоза у детей. Онкогематология 2018;13(1):73–82. DOI: 10.17650/1818-8346-2018-13-1-73-82.Bennett J., Catovsky D., Daniel M. et al. Proposals for the classification of the acute leukaemias. French-American-British (FAB) co-operative group. Br J Haematol 1976;33(4):451–8. PMID: 188440.Bene M.C., Castoldi G., Knapp W. et al. Proposals for the immunological classification of acute leukemias. European Group for the Immunological Characterization of Leukemias (EGIL). Leukemia 1995;9(10):1783–6. PMID: 7564526.Béné M.C., Nebe T., Bettelheim P. et al. Immunophenotyping of acute leukemia and lymphoproliferative disorders: a consensus proposal of the European LeukemiaNet Work Package 10. Leukemia 2011;25(4):567–74. DOI: 10.1038/leu.2010.312. PMID: 21252983.Harbott J., Viehmann S., Borkhardt A. et al. Incidence of TEL/AML1 fusion gene analyzed consecutively in children with acute lymphoblastic leukemia in relapse. Blood 1997;90(12):4933–7. PMID: 9389711.GOST(State Standard) Р 53022.3–2008. Clinical laboratory technologies. Quality requirements for clinical laboratory tests. Part 3. Rules for assessment the clinical informativity of laboratory tests. Available at: http://docs.cntd.ru/document/1200072565. Access Mode 08/16/2017. (In Russ.).ГОСТ Р 53022.3–2008. Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 3. Правила оценки клинической информативности лабораторных тестов. Доступно по: http://docs.cntd.ru/document/1200072565. Режим доступа: 16.08.2017. [Bene M.C., Bernier M., Casasnovas R.O. et al. The reliability and specificity of c-kit for the diagnosis of acute myeloid leukemias and undifferentiated leukemias. The European Group for the Immunological Classification of Leukemias (EGIL). Blood 1998;92(2):596–9. PMID: 9657760.Hrusák O., Porwit-MacDonald A. Antigen expression patterns reflecting genotype of acute leukemias. Leukemia 2002;16(7):1233–58. DOI: 10.1038/sj.leu.2402504. PMID: 12094248.Popov A.M., Tsaur G.A., Verzhbitskaya T.Y. et al. Immunophenotypic investigation of infant acute lymphoblastic leukemia. Onkogematologiya = Oncohematology 2012;7(2):14–24. (In Russ.). DOI: 10.17650/1818-8346-2012-7-2-14-24.Попов А.М., Цаур Г.А., Вержбицкая Т.Ю. и др. Иммунофенотипическая характеристика острого лимфобластного лейкоза у детей первого года жизни. Онкогематология 2012;7(2):14–24. DOI: 10.17650/1818-8346-2012-7-2-14-24.Buldini B., Zangrando A., Michielotto B. et al. Identification of immunophenotypic signatures by clustering analysis in pediatric patients with Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia. Am J Hematol 2010;85(2): 138–41. DOI: 10.1002/ajh.21595. PMID: 20095033.De Zen L., Orfao A., Cazzaniga G. et al Quantitative multiparametric immunophenotyping in acute lymphoblastic leukemia: correlation with specific genotype. I. ETV6/AML1 ALLs identification. Leukemia 2000;14(7):1225–31. PMID: 10914546.Alessandri A., Reid G., Bader S. et al. ETV6(TEL)–AML1 pre-B acute lymphoblastic leukaemia cells are associated with a distinct antigenpresenting phenotype. Br J Haematol 2002;116(2):266–72. PMID: 11841426.Saeys Y., Van Gassen S., Lambrecht B.N. Computational flow cytometry: helping to make sense of highdimensional immunology data. Nat Rev Immunol 2016;16(7):449–62. DOI: 10.1038/nri.2016.56. PMID: 27320317.