OncohematologyOncohematologyОнкогематология1818-83462413-4023Publishing House ABV Press25910.17650/1818-8346-2017-12-3-57-62BASIC RESEARCHФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕTHE USE OF DIRECT ANTIGLOBULIN TEST TO DETECT AUTOANTIBODIES IN PATIENTS WITH ANEMIA OF VARIOUS ORIGINSПРИМЕНЕНИЕ ПРЯМОГО АНТИГЛОБУЛИНОВОГО ТЕСТА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АУТОАНТИТЕЛ ПРИ АНЕМИЯХ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗАMineevaN. V.МинееваН. В.
Russian Federation

16 2nd Sovetskay Str., St. Petersburg, 191024

191024 Санкт-Петербург, ул. 2-я Советская, 16

KrobinetsI. I.КробинецИ. И.
Russian Federation

16 2nd Sovetskay Str., St. Petersburg, 191024

Ирина Ивановна Кробинец.

191024 Санкт-Петербург, ул. 2-я Советская, 16

transfusion_spb@mail.ruBodrovaN. N.БодроваН. Н.
Russian Federation

16 2nd Sovetskay Str., St. Petersburg, 191024

191024 Санкт-Петербург, ул. 2-я Советская, 16

BogdanovaI. O.БогдановаИ. О.
Russian Federation

16 2nd Sovetskay Str., St. Petersburg, 191024

191024 Санкт-Петербург, ул. 2-я Советская, 16

Russian Research Institute of Hematology and Transfusiology, Federal Medical and Biological AgencyФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства»2410201712357622510201725102017https://oncohematology.abvpress.ru/ongm/article/view/259

Introduction. Autoantibodies directed against red blood cells (RBCs) are the main cause of hemolysis in patients with autoimmune hemolytic anemia (AIHA) and they can also complicate the course of certain diseases. Various methods are used to detect autoantibodies, but most of all, a polyand monospecific direct antiglobulin test (DAT) is applied. The method is based on the detection of immunoglobulins of G, M, A classes and С3 complement components bound with RBCs surfaces. DAT is used to differentiate between immuno-dependent and immuno-independent anemia. Objective of this study was the analysis of DAT results in patients with various diseases accompanied by anemia.

Materials And Methods. Blood samples of patients aged between 5 to 90 years with anemia who underwent examination and/or treatment at the Russian Research Institute of Hematology and Transfusiology of Russian Federal Medical-biological Agency were used as a study material. The results of laboratory testing for the period from 2013 to 2016 were examined and data analysis was performed. The determination of classes of antibodies directed against RBCs was carried out in a direct Coombs reaction using a gel system DiaMed-ID (DiaMed Micro Typing System, Switzerland).

Results. The DAT results were positive in patients with AIHA (53 %), paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH, 100 %), cryoglobulinemia (62.5 %), chronic lymphoproliferative diseases (CLPD, 27.5 %), multiple myeloma (MM, 23.6 %), anemia of unknown origin (21.4 %), and other autoimmune diseases (19 %). In blood samples of DAT-positive patients, monospecific IgG or C3 complement components, as well as various combinations of Ig with a complement component: IgG + C3, IgG + IgM + C3, IgM + C3, and IgG + IgA, were detected. In our study, positive DAT result was not always associated with laboratory evidence of hemolysis. Among all DAT-positive patients, signs of hemolysis were observed in 53.2 % of cases. Only in patients with AIHA and PNH hemolysis was observed in 100 % of cases.

Conclusions. A positive DAT result is one of the criteria for diagnosing of immune hemolytic anemia, however, it does not always indicate an autoimmune pathogenesis of anemia, the presence of specific autoantibodies, and thus is not always associated with hemolysis. Only a comprehensive assessment of a clinical picture and DAT results makes it possible to diagnose the disease.

Введение. Аутоантитела к эритроцитам являются главной причиной гемолиза у пациентов с аутоиммунными гемолитическими          анемиями (АИГА) и могут осложнять течение различных заболеваний. Для выявления аутоантител используют различные методы, но наиболее широко применяемым является прямой антиглобулиновый тест (ПАГТ) – полиили моноспецифический. В основе     метода лежит детекция иммуноглобулинов (Ig) классов G, M, A и компонентов комплемента С3, фиксированных на поверхности                эритроцита. ПАГТ применяют для дифференциальной диагностики анемий на иммунно-зависимые и иммунно-независимые.

Цель исследования – проведение анализа результатов ПАГТ у пациентов с различными заболеваниями, сопровождаемыми анемией.

Материалы и методы. Материалом для исследования являлись образцы крови пациентов от 5 до 90 лет с анемией, проходивших             обследование и/или лечение в ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства». Были изучены результаты лабораторного тестирования образцов крови за период               2013–2016 гг. и проанализированы полученные данные. Определение классов Ig – антител к антигенам эритроцитов – проводили в прямой реакции Кумбса (R.R. Coombs) с помощью гелевой системы DiaMed-ID (DiaMed Micro Typing System, Швейцария).   

Результаты. ПАГТ был положительным у пациентов с АИГА (53 %), пароксизмальной ночной гемоглобинурией (ПНГ) (100 %),   криоглобулинемией (62,5 %), хроническими лимфопролиферативными заболеваниями (ХЛПЗ) (27,5 %), множественными миеломами (23,6 %), анемиями неясного генеза (21,4 %) и прочими аутоиммунными заболеваниями (19 %). В образцах крови пациентов             с положительным результатом ПАГТ были выявлены как моноспецифичные IgG или компоненты комплемента С3, так и различные сочетания Ig с компонентом комплемента: IgG + C3; IgG + IgM + C3; IgM + C3 и IgG + IgА. В нашем исследовании положительный результат ПАГТ не всегда был ассоциирован с гемолизом. Среди всех пациентов с положительным ПАГТ признаки гемолиза наблюдались в 53,2 % случаев, и только у пациентов с АИГА и ПНГ они присутствовали в 100 %.   

Заключение. Положительный ПАГТ является одним из критериев для диагностики иммунных гемолитических анемий, однако              не всегда свидетельствует об аутоиммунном патогенезе анемии, наличии специфических аутоантител и, соответственно,           не всегда ассоциирован с гемолизом. Таким образом, только комплексная оценка клинической картины с результатами ПАГТ        позволит провести диагностику заболевания.

autoantibodiesdirect antiglobulin testhemolysiscomplement componentsautoimmune hemolytic anemiaаутоантителапрямой антиглобулиновый тестгемолизкомпоненты комплементагемолитическая анемия1.
 Rosse
W.F.
Autoimmune
hemolytic
anemia.
Hosp
Prac
1985;20(8):105–19.

PMID:
3926784.Rosse W.F. Autoimmune hemolytic anemia. Hosp Prac 1985;20(8):105–19. PMID: 3926784.2.
 Coombs
R.R.,
Mourant
A.E.,
Race
R.R.

A
new
test
for
the
detection
of
weak
and
incomplete
Rh
agglutinins.
Br
J
Exp
Pathol
1945;26:255–66.
PMID:
21006651.
Coombs R.R., Mourant A.E., Race R.R. A new test for the detection of weak and incomplete Rh agglutinins. Br J Exp Pathol 1945;26:255–66. PMID: 21006651.3.
 Janvier
D.,
Sellami
F.,
Missud
F.
et
al.

Severe
autoimmune
hemolytic
anemia
caused
by
a
warm
IgA
autoantibody
directed
against
the
third
loop
of
band.
Transfusion
2002;42(12):1547–52.

PMID:
12473132.Janvier D., Sellami F., Missud F. et al. Severe autoimmune hemolytic anemia caused by a warm IgA autoantibody directed against the third loop of band. Transfusion 2002;42(12):1547–52. PMID: 12473132.4.
 Bardill
B.,
Mengis
C.,
Tschopp
M.
et
al.
Severe
IgA-mediated
auto-immune
hae-molytic
anaemia
in
a
48-yr-old
woman.
Eur
J
Haematol
2003;70(1):60–3.

PMID:
12631260.Bardill B., Mengis C., Tschopp M. et al. Severe IgA-mediated auto-immune hae-molytic anaemia in a 48-yr-old woman. Eur J Haematol 2003;70(1):60–3. PMID: 12631260.5.
 Zeerleder
S.
Autoimmune
haemolytic
anaemia
–
a
practical
guide
to
cope
with

a
diagnostic
and
therapeutic
challenge.
Neth
J
Med
2011;69(4):177–84.

PMID:
21527804.Zeerleder S. Autoimmune haemolytic anaemia – a practical guide to cope with a diagnostic and therapeutic challenge. Neth J Med 2011;69(4):177–84. PMID: 21527804.6.
 Packman
C.H.
Hemolytic
anemia
due
to
warm
autoantibodies.
Blood
Rev
2008;22(1):17–31.
DOI:
10.1016/j.blre.2007.08.001.
PMID:
17904259.Packman C.H. Hemolytic anemia due to warm autoantibodies. Blood Rev 2008;22(1):17–31. DOI: 10.1016/j.blre.2007.08.001. PMID: 17904259.7.
 Shimanovsky
A.,
Alvarez
A.J.,
Murali
S.

et
al.
Autoimmune
manifestations
in
patients
with
multiple
myeloma
and
monoclonal
gammopathy
of
undetermined
significance.
BBA
Clin
2016;6:12–8.

DOI:
10.1016/j.bbacli.2016.05.004.
PMID:
27331023.Shimanovsky A., Alvarez A.J., Murali S. et al. Autoimmune manifestations in patients with multiple myeloma and monoclonal gammopathy of undetermined significance. BBA Clin 2016;6:12–8. DOI: 10.1016/j.bbacli.2016.05.004. PMID: 27331023.8.
 D’Arena
G.,
Guariglia
R.,
La
Rocca
F.

et
al.
Autoimmune
Cytopenias
in
Chronic
Lymphocytic
Leukemia.
Clin
Dev

Immun
2013;2013:730131.

DOI:
10.1155/2013/730131:1-8.

PMID:
23690826.
D’Arena G., Guariglia R., La Rocca F. et al. Autoimmune Cytopenias in Chronic Lymphocytic Leukemia. Clin Dev Immun 2013;2013:730131. DOI: 10.1155/2013/730131:1-8. PMID: 23690826.9.
 Berentsen
S.,
Sundic
T.
Red
Blood
Cell
Destruction
in
Autoimmune
Hemolytic
Anemia:
Role
of
Complement
and
Potential
New
Targets
for
Therapy.
Biomed
Res
Int
2015;2015:363278.

DOI:
10.1155/2015/363278:1-11.

PMID:
25705656.
Berentsen S., Sundic T. Red Blood Cell Destruction in Autoimmune Hemolytic Anemia: Role of Complement and Potential New Targets for Therapy. Biomed Res Int 2015;2015:363278. DOI: 10.1155/2015/363278:1-11. PMID: 25705656.10.
 Трикоменас
Н.Н.
Клинико-лабораторные
особенности
течения
системной
красной
волчанки
у
больных
с
криоглобулинемией.
Автореф.
дис.
…
канд.
мед.
наук.
Оренбург,
2011.
Доступно

по:
http://medical-diss.com/medicina/kliniko-laboratornye-osobennosti-techeni-ya-sistemnoy-krasnoy-volchanki-u-bolnyh-s-krioglobulinemiey.
[Trikomenas
N.N.
Clinico-laboratory
features
of
systemic
lupus
erythematosus
in
patients
with
cryoglobulinemia.
Аuthor’s
abstract
…

of
thesis
of
candidate
of
medicine,
2011

(In
Russ.).
Available
at:
http://medical-diss.com/medicina/kliniko-laboratornye-osobennosti-techeniya-sistemnoy-krasnoy-volchanki-u-bolnyh-s-krioglobulinemiey].
Трикоменас Н.Н. Клинико-лабораторные особенности течения системной красной волчанки у больных с криоглобулинемией. Автореф. дис. … канд. мед. наук. Оренбург, 2011. Доступно по: http://medical-diss.com/medicina/kliniko-laboratornye-osobennosti-techeni-ya-sistemnoy-krasnoy-volchanki-u-bolnyh-s-krioglobulinemiey. [Trikomenas N.N. Clinico-laboratory features of systemic lupus erythematosus in patients with cryoglobulinemia. Аuthor’s abstract … of thesis of candidate of medicine, 2011 (In Russ.). Available at: http://medical-diss.com/medicina/kliniko-laboratornye-osobennosti-techeniya-sistemnoy-krasnoy-volchanki-u-bolnyh-s-krioglobulinemiey].11.
 Хайдарова
Ю.М.,
Курманова
Г.М.
Синдром
криоглобулинемии
при
гепатите
С.
Вестник
КазНМУ
2012;2:18897.
[Khaydarova
Yu.M.,

Kurmanova
G.M.
Cryoglobulinemia
syndrome
in
hepatitis
C.
Vestnik
KazNMU
=

Bulletin
of
KazNMU
2012;2:188–97

(In
Russ.)].Хайдарова Ю.М., Курманова Г.М. Синдром криоглобулинемии при гепатите С. Вестник КазНМУ 2012;2:18897. [Khaydarova Yu.M., Kurmanova G.M. Cryoglobulinemia syndrome in hepatitis C. Vestnik KazNMU = Bulletin of KazNMU 2012;2:188–97 (In Russ.)].12.
 Lin
J.S.,
Hao
T.C.,
Lyou
J.Y.
et
al.
Clinical
application
of
a
flow
cytometric
direct
antiglobulin
test.
Transfusion
2009;49:1335–46.
DOI:
10.1111/j.1537-2995.2009.02130.x.
PMID:
19320864.Lin J.S., Hao T.C., Lyou J.Y. et al. Clinical application of a flow cytometric direct antiglobulin test. Transfusion 2009;49:1335–46. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2009.02130.x. PMID: 19320864.13.
 Dearden
C.,
Wade
R.,
Else
M.
et
al.

The
prognostic
significance
of
a
positive
direct
antiglobulin
test
in
chronic
lymphocytic
leukemia:
a
beneficial
effect
of
the
combination
of
fludarabine
and
cyclophosphamide
on
the
incidence
of
hemolytic
anemia.
Blood
2008;111(4):1820–6.
DOI:
10.1182/blood-2007-07-101303.
PMID:
18055869.Dearden C., Wade R., Else M. et al. The prognostic significance of a positive direct antiglobulin test in chronic lymphocytic leukemia: a beneficial effect of the combination of fludarabine and cyclophosphamide on the incidence of hemolytic anemia. Blood 2008;111(4):1820–6. DOI: 10.1182/blood-2007-07-101303. PMID: 18055869.14.
 Chapuy
C.I.,
Nicholson
R.T.,
Aguad
M.D.
et
al.
Resolving
the
daratumumab
interference
with
blood
compatibility
testing.
Transfusion
2015;55(6):1545–54.

DOI:
10.1111/trf.13069.

PMID:
25764134.Chapuy C.I., Nicholson R.T., Aguad M.D. et al. Resolving the daratumumab interference with blood compatibility testing. Transfusion 2015;55(6):1545–54. DOI: 10.1111/trf.13069. PMID: 25764134.15.
 Garratty
G.
Effect
of
cell-bound
proteins
on
the
in vivo
survival
of
circulating
blood
cells.
Gerontology
1991;37:68–94.

PMID:
2055500.Garratty G. Effect of cell-bound proteins on the in vivo survival of circulating blood cells. Gerontology 1991;37:68–94. PMID: 2055500.16.
 Chaplin
H.,
Nasongkla
M.,
Monroe
M.C.
Quantification
of
red
blood
cellbound
C3d
in
normal
subjects
and
random
hospitalized
patients.

Br
J
Haematol
1981;48:69–78.

PMID:
6972779.Chaplin H., Nasongkla M., Monroe M.C. Quantification of red blood cellbound C3d in normal subjects and random hospitalized patients. Br J Haematol 1981;48:69–78. PMID: 6972779.17.
 Freedman
J.,
Ho
M.,
Barefoot
C.
Red
blood
cell-bound
C3d
in
selected
hospital
patients.
Transfusion
1982;22:515–20.
PMID:
6216638.Freedman J., Ho M., Barefoot C. Red blood cell-bound C3d in selected hospital patients. Transfusion 1982;22:515–20. PMID: 6216638.18.
Williams
M.,
Thomas
D.,
Harman
C.P.

et
al.
Positive
direct
antiglobulin
tests
due
to
clavulanic
acid.
Antimicrob
Agents
Chemother
1985;27(1):125–7.

PMID:
3872623.Williams M., Thomas D., Harman C.P. et al. Positive direct antiglobulin tests due to clavulanic acid. Antimicrob Agents Chemother 1985;27(1):125–7. PMID: 3872623.